DNA是生命构成的基础,而在研究中,我们通常需要从样本中提取出纯粹的DNA进行进一步分析。然而,在提取过程中,DNA往往会被打断成碎片状。这些碎片不仅会给后续实验带来麻烦,而且还可能对实验结果产生意想不到的影响!
DNA碎片对PCR扩增的影响
- PCR(聚合酶链式反应)是现供卵试管物学研究中广泛使用的技术之一。PCR可以将少量DNA扩增成足够数量供后续分析使用。但是当样本中存在大量DNA碎片时,PCR扩增就会受到极大干扰。
- 由于PCR扩增目标序列需要两个引物来定向复制,所以如果模板DNA被打断成小碎片,则引物可能无法正确定位并复制目标序列。此外在PCR扩增过程中,如果某个引物能够识别并复制出某个小段碎片,则该小段碎片将被无限扩增,并干扰其他目标序列的扩增。
- 在进行PCR前必须先检测样本中是否存在过多的小段DNA,并采取相应措施减少其干扰。基因测序是现供卵试管物学研究中最重要、最常用的技术之一。在测序前通常需要进行文库构建、接头和桥接等工作,其中就包括了将高分子量、完整性良好、长度均匀分布的DNA转化为适合机器读取和处理的文库。
当样本中存在大量小段或大段不规则长度、质量较差或含有修饰基团等问题时,就会导致文库构建失败或者质量下降。甚至在测序过程中也可能出现错误或者低质量数据点。在进行基因测序前必须先检测样品质量,并采用适当措施去除低质量和异常数据点。
虽然我们无法避免在实验室操作过程中产生少许DNA损伤和断裂现象,但是我们可以通过科学严谨地方法保证实验结果准确可靠。所以在任何实验操作前都要认真评估材料和设备,并根据实际情况选择合适且有效地方法来规避相关问题。